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Type: Dissertação
Title: Isolamento, seleção e avaliação do potencial de biodegradação de glifosato (n-(Fosfonometil)glicina) por microrganismos isolados de solo de lavoura, em Laranjeiras do Sul, PR.
Author: Demichelli, Fernanda Natalí
First advisor: Cazarolli, Luisa Helena
metadata.dc.contributor.advisor2: Passos, Cátia Tavares dos
Resume: O uso abusivo de glifosato, um dos agrotóxicos mais utilizados no Brasil, está relacionado a problemas de saúde e ao ambiente. Diante disso, o presente trabalho teve como objetivo isolar, avaliar a capacidade de crescimento ou degradação e posteriormente identificar microrganismos autóctones degradadores de glifosato de um solo com uso intensivo deste agrotóxico. Foram coletadas 12 amostras de solo aleatoriamente (0-10 cm de profundidade), homogeneizadas e após transferido 1 g da amostra para erlenmeyer contendo 50 mL de meio mineral (MM) (g/L, KCl 0,7; KH2PO4 2,0; Na2HPO4 3,0; NH4NO3 1,0; MgSO4 1,0; FeSO4 4,0; MnCl2 0,2; CaCl2 0,2; pH 7,2) com 100 mg/L de glifosato (única fonte de carbono) com 3 transferências subsequentes (1 mL) a cada cinco dias, incubando a 28 °C. Após, foi realizada a contagem em placas e as bactérias e fungos morfologicamente diferentes foram isolados em ágar nutriente e sabouraud com 300 mg/L de glifosato, respectivamente. A seguir, os fungos foram incubados em ágar MM sólido com 300 mg/L de glifosato, como única fonte de carbono, a 28 ºC/14 dias. Foi realizada a medida diária do crescimento micelial radial e calculada a velocidade de crescimento por meio de regressão linear dos raios das colônias. Do total de 18 fungos isolados, 11 utilizaram o glifosato como fonte de carbono. Foram identificados oito gêneros de fungos filamentosos e dois falsos fungos, que apresentaram as maiores velocidades de crescimento radial. Os gêneros que mais se destacaram foram: Aspergillus sp., Fusarium sp., Penicillium sp. e Geotrichum sp. Foram isoladas 25 bactérias (47% bacilos gram negativas), destas, seis permaneceram viáveis até o experimento de degradação de glifosato. Para o preparo do inóculo bacteriano, uma alçada foi transferida para erlenmeyers com 100 mL de caldo nutriente e 300 mg/L de glifosato, incubado a 150 rpm/48 h. Após três lavagens (MM), o inóculo foi padronizado (escala de McFarland). O ensaio do potencial de degradação das bactérias isoladas foi realizado com a incubação do inóculo (5x106 UFC/mL) em MM na ausência/presença de diferentes concentrações de glifosato (300, 500 e 700 mg/L) utilizando o indicador redox 2,6-diclorofenol-indofenol (DCPIP), incubadas em estufa (28 ºC) e realizadas medidas espectrofotométricas a 600 nm no período de 0-120h. As 6 bactérias testadas apresentaram velocidade degradação de DCPIP nas concentrações testadas, indicando que possivelmente utilizaram o glifosato como fonte de carbono. A bactéria B8, relativamente às demais, foi a que mais reduziu a quantidade de DPCIP. Os resultados sugerem que os microrganismos isolados são tolerantes e apresentam alto potencial de degradação de glifosato, podendo ser utilizados em futuros estudos de biorremediação de solos contaminados com este agrotóxico.
Abstract: The abusive use of glyphosate, one of the most widely used pesticides in Brazil is related to health issues and the environment. Therefore, this study aimed to isolate, evaluate the growth capacity or degradation and subsequently identify indigenous microorganisms degrading glyphosate in a soil with intensive use of this pesticide. The 12 samples were collected randomly soil (0-10 cm depth), homogenized and them 1 g of the sample was transferred in a flask containing 50 ml of mineral medium (MM) (g/L KCl 0.7; KH2PO4 2.0; Na2HPO4, 3.0; NH4NO3 1.0; MgSO4 1.0; FeSO4 4.0; MnCl2, 0.2; CaCl2 0.2; pH 7.2) with 100 mg/L glyphosate (as sole carbon source) 3 subsequent transfers (1 ml) every five days and incubation at 28 ° C. Bacteria and fungi morphologically different were isolated on nutrient agar, and Sabouraud with 300 mg/L of glyphosate, respectively. The following fungi were incubated on solid MM agar with 300 mg/l glyphosate as sole carbon source at 28 ° C by 14 days. The radial mycelial growth was daily measured and the growth rate were calculated by linear regression using the colonies rays. Of the total of 18 fungal isolates, 11 used glyphosate as a carbon source. eight genera of filamentous fungi and two false fungi, with the highest rates of radial growth were identified. The genres that stood out were: Aspergillus, Fusarium sp, Penicillium sp... and Geotrichum sp. 25 Bacteria were isolated (47% gram-negative bacilli), these six remained viable by the experiment of glyphosate degradation. To prepare the inoculum, was transferred to a Erlenmeyer flasks with 100 ml of nutrient broth and 300 mg/L of glyphosate, incubated at 150 rpm by 48 h. After three washes (MM), the inoculum was standardized using McFarland scale. The potential for degradation of the test isolates was performed with incubation inoculum (5x106 CFU/ml) in MM in the absence or presence of different concentrations of glyphosate (300, 500 and 700 mg/L) using redox indicator 2,6-dichlorophenol-indophenol (DCPIP), incubated in a greenhouse (28 °C) and spectrometric measured at 600 nm in 0-120h period. The 6 bacterial strains tested showed DCPIP degradation rate at the concentrations tested, indicating that possibly used glyphosate as a carbon source. The B8 bacteria in relation to the others, was the most reduced the amount of DPCIP. The results suggest that microorganisms are tolerant and have a high potential for glyphosate degradation and can be used in future studies of bioremediation of soils contaminated with this pesticide.
Keywords: Glifosato
Biodegradação
Velocidade de crescimento
Agrotóxicos
Microrganismos
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal da Fronteira Sul
Acronym of the institution: UFFS
College, Institute or Department: Campus Laranjeiras do Sul
Name of Program of Postgraduate studies: Programa de Pós-Graduação em Agroecologia e Desenvolvimento Rural Sustentável
Type of Access: Acesso Aberto
URI: https://rd.uffs.edu.br/handle/prefix/189
Issue Date: 7-Mar-2016
metadata.dc.level: Mestrado
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